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Enzimas de Restrição

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O que são

As enzimas de restrição são enzimas que cortam a molécula de DNA em um lugar particular.

Elas são ferramentas essenciais para a tecnologia do DNA recombinante.

Enzimas de restrição, também chamadas nucleases de restrição (ECORI neste exemplo), circundam a molécula de DNA no ponto a ser digerido (seqüência GAATTC).

Cortando uma fita da dupla hélice num ponto e a segunda fita em um ponto diferente e complementar (entre as bases G e A).

As fitas simples separadas possuem pontas coesivas complementares, as quais permitem a perfeita recombinação.

Enzimas de Restrição

Estas enzimas são utilizadas pela bactéria Escherichia coli (ECORI neste exemplo) para cortar o DNA viral que penetram em seu citoplasma!

A partir da descoberta destas enzimas, os pequisadores puderam manipular o DNA com extrema precisão.

Esta descoberta revolucionou a biologia molecular, porque possibilitou montar moléculas de DNA recombinante.

Fonte: www.biomania.com

Enzimas de Restrição

O que são

As enzimas de restrição são enzimas de corte de DNA encontrados em bactérias (e colhidas a partir deles para uso). Porque eles cortam dentro da molécula, que são muitas vezes chamado de endonucleases de restrição.

A fim de ser capaz de sequenciar o DNA, é primeiro necessário cortá-la em fragmentos menores. Muitas enzimas que digerem DNA (como aqueles em seu fluido pancreático) pode fazer isso, mas a maioria deles não servem para o trabalho de seqüência porque eles cortaram cada molécula de forma aleatória.

Isto produz uma coleção heterogénea de fragmentos de tamanhos variados. O que é necessário é um meio para clivar a molécula de ADN em alguns locais precisamente localizadas de modo que um pequeno conjunto de fragmentos homogéneos são produzidos. As ferramentas para isso são as endonucleases de restrição. A mais raro o local em que reconhece, quanto menor for o número de peças produzidas por uma determinada endonuclease de restrição.

As enzimas de restrição

As enzimas de restrição são endonucleases que podem ser purificadas a partir de bactérias e que reconhecem sequências específicas, com 4 a 8pb, clivando em seguida as duas cadeias de DNA nesse mesmo sítio; essas sequências designam-se por sítio de restrição e são normalmente curtas sequências palindrómicas, isto é, a sequência do sítio de restrição é a mesma em ambas as cadeias quando estas são “lidas” no sentido 5’ – 3’.

Os sítios de clivagem são portanto definidos pela sequência de nucleotídeos, e é portanto esta que define o tamanho dos fragmentos obtidos.

As diferentes enzimas de restrição apresentam especificidade para diferentes sequências o que permite escolher a(s) enzima(s) de restrição necessárias para clivar um fragmento de DNA com um determinado gene.

Fonte: med.up.pt

Enzimas de Restrição

As enzimas de restrição são usadas em biotecnologia para cortar DNA em cadeias menores, a fim de estudar as diferenças de comprimento de fragmentos entre os indivíduos ou para a clonagem de gene.

As enzimas de restrição (ou endonucleases de restrição) são enzimas que cortam o DNA em locais específicos.

As enzimas reconhecem determinadas sequencias nucleotídicas do DNA e fragmentam a molécula sempre que identificam essa sequência, produzindo extremidades coesivas.

Enzimas de Restrição
Enzima de Restrição – EcoRI

As enzimas de restrição foram descobertas em bactérias que resistiam à infecção dos vírus (bacteriófagos) produzindo enzimas que seccionavam o DNA viral, fragmentando-o em porções inofensivas.

As enzimas atuam quando identificam determinadas sequencias especificas – locais de restrição – geralmente compostas por 4-6 nucleótidos. As enzimas cortam as ligações entre o grupo hidroxilo 3’ de um nucleótido e o grupo fosfato 5’ do nucleótido adjacente. As extremidades das cadeias seccionadas – extremidades coesivas – quando contactam com outras resultantes da ação da mesma enzima podem emparelhar por complementaridade.

Tipos

Existem três tipos diferentes de enzimas de restrição:

Tipo I: corta o DNA em locais aleatórios, tanto quanto mil ou mais pares de bases do local de reconhecimento. Cortes do tipo III de cerca de 25 pares de bases do site. Tipos I e III requerem ATP e pode ser grandes enzimas com múltiplas subunidades. Enzimas do tipo II, que são predominantemente utilizados na biotecnologia, cortar o ADN dentro da sequência de reconhecimento, sem a necessidade de ATP, e são menores e mais simples. Tipo II: enzimas restrição são nomeados de acordo com a espécie bacteriana a partir do qual eles estão isolados. Por exemplo, a enzima Eco RI foi isolado a partir de co li E..

Tipo II: enzimas de restrição pode gerar dois tipos diferentes de cortes, dependendo se eles cortam ambas as cadeias no centro da sequência de reconhecimento, ou cada fio mais perto de uma das extremidades da sequência de reconhecimento. O primeiro corte vai gerar “termina sem corte” sem saliências nucleotídeos. Este último, gera “pegajoso” ou “coesa” termina, porque cada fragmento resultante de DNA tem uma saliência que complementa os outros fragmentos. Ambos são úteis em genética molecular para a tomada de ADN recombinante e proteínas.

Fonte: casadasciencias.org

Enzimas de Restrição

Enzima de restrição, também chamado de endonuclease de restrição, uma proteína produzida pela bactérias que cliva o DNA em locais específicos ao longo da molécula.

Na célula bacteriana, enzimas de restrição clivam o DNA estranho, eliminando, assim, os organismos infecciosos. As enzimas de restrição pode ser isolado a partir de células bacterianas e utilizado no laboratório para manipular os fragmentos de DNA, tais como aqueles que contêm genes; por esta razão eles são ferramentas indispensáveis de DNA recombinante tecnologia, ou de engenharia genética.

Uma bactéria usa uma enzima de restrição para se defender contra vírus bacterianos chamados bacteriófagos ou fagos. Quando um fago infecta uma bactéria, ele insere o seu DNA na célula bacteriana, de modo que ele pode ser replicado. A enzima de restrição impede a replicação do DNA do fago, cortando-a em vários pedaços. As enzimas de restrição foram nomeados pela sua capacidade para restringir ou limitar o número de estirpes de bacteriófago que pode infectar uma bactéria.

Cada enzima de restrição reconhece uma sequência curta, específica de bases de nucleotídeos (as quatro subunidades químicas básicas da molécula do DNA-adenina linear de cadeia dupla, citosina, timina, guanina e).

Estas regiões são chamados as sequências de reconhecimento e são distribuídas aleatoriamente ao longo do DNA. Diferentes bactérias espécies fazer enzimas de restrição que reconhecem diferentes nucleotídeos seqüências.

Quando uma restrição de endonuclease reconhece uma sequência, que corta através da molécula de DNA, catalisando a hidrólise (divisão de uma ligação química através da adição de uma molécula de água) da ligação entre os nucleótidos adjacentes. Bactérias impedir o seu próprio DNA de ser degradado desta maneira, disfarçando suas sequências de reconhecimento. As enzimas denominadas metilases adicionar grupos metilo (-CH 3) de adenina ou citosina bases dentro da sequência de reconhecimento, o qual é, portanto, modificados e protegidas da endonuclease. A enzima de restrição e a sua correspondente metilase constituem o sistema de restrição-modificação de uma espécie bacteriana.

Existem três classes de enzimas de restrição, os tipos designados: I, II, e III.

Tipos I e III, as enzimas são semelhantes na medida em que tanto a atividade de restrição e metilase são realizadas por uma grande enzima complexa, em contraste com o sistema de tipo II, em que a enzima de restrição é independente da sua metilase.

Tipo II enzimas de restrição também diferem dos outros dois tipos em que clivam o DNA em locais específicos dentro do local de reconhecimento; os outros clivar o DNA de forma aleatória, por vezes centenas de bases da sequência de reconhecimento.

Fonte: www.britannica.com

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